色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。
選購(gou)色譜(pu)柱一定要(yao)認真看待，即使都是C18柱，不(bu)同(tong)品牌、同(tong)一品牌不(bu)同(tong)系列都有(you)不(bu)同(tong)的(de)(de)功能，有(you)能耐受低pH值的(de)(de)、有(you)耐高(gao)溫的(de)(de)、有(you)適合堿(jian)性樣品的(de)(de)等(deng)等(deng)。
柱(zhu)長，內(nei)徑，如250*4.6mm。一般(ban)柱(zhu)長在2—250mm，柱(zhu)越長，分(fen)離度(du)(du)越高，但柱(zhu)壓更高，分(fen)離所需時間(jian)更長;但分(fen)離度(du)(du)與理論(lun)塔板數的(de)平方根成正比，所以(yi)(yi)一昧增加柱(zhu)長并不是有(you)效的(de)分(fen)離手段，一般(ban)情(qing)況下，150mm、5um的(de)填料可以(yi)(yi)提(ti)供足(zu)夠的(de)塔板數。
粒(li)徑，影響色譜分(fen)(fen)離(li)度。粒(li)徑越(yue)(yue)(yue)小，分(fen)(fen)離(li)越(yue)(yue)(yue)快，柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)效(xiao)(xiao)越(yue)(yue)(yue)高(gao)，但(dan)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)壓力越(yue)(yue)(yue)高(gao)，柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)容(rong)易被污染(ran)，導致柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)壽(shou)命降低。常(chang)見分(fen)(fen)析柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)通常(chang)使(shi)用5um填料(liao)，復雜的(de)多組分(fen)(fen)樣品分(fen)(fen)離(li)一(yi)般使(shi)用3.5um粒(li)徑，更大內徑的(de)制備色譜柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)通常(chang)使(shi)用更大的(de)粒(li)徑。如果固定相(xiang)選(xuan)擇是(shi)(shi)正(zheng)確，但(dan)是(shi)(shi)分(fen)(fen)離(li)度不夠，那么選(xuan)用更小的(de)粒(li)度的(de)填料(liao)是(shi)(shi)很有用的(de)。3.5um填料(liao)填充柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)的(de)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)效(xiao)(xiao)比(bi)相(xiang)同條件下的(de)5um填料(liao)的(de)柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)效(xiao)(xiao)提高(gao)近30%;然而，3.5um的(de)色譜柱(zhu)(zhu)(zhu)(zhu)的(de)背壓卻是(shi)(shi)5um的(de)2倍(bei)，因此如何選(xuan)擇填料(liao)粒(li)徑需要根據現實情況而定。
孔(kong)(kong)徑(jing)(jing)，60A，100A，120A，300A等。孔(kong)(kong)徑(jing)(jing)小(xiao)，則(ze)含孔(kong)(kong)率高(gao)，比表面積大(da)(da)，載碳量高(gao);色譜柱填料孔(kong)(kong)徑(jing)(jing)大(da)(da)小(xiao)需和分(fen)子(zi)(zi)大(da)(da)小(xiao)相匹配(pei)，保(bao)證分(fen)子(zi)(zi)自由進出填料孔(kong)(kong)并與(yu)孔(kong)(kong)內表面的鍵(jian)合相進行分(fen)離分(fen)配(pei)，通常要求孔(kong)(kong)徑(jing)(jing)直(zhi)徑(jing)(jing)是分(fen)子(zi)(zi)直(zhi)徑(jing)(jing)的3倍以上，一(yi)般(ban)小(xiao)分(fen)子(zi)(zi)使用80—120A，大(da)(da)分(fen)子(zi)(zi)使用300A。
顆粒形狀(zhuang)，一般有球形和(he)不規則形，當使用黏度較大的流動相時，球形顆粒可以降低柱壓，延長(chang)色譜(pu)柱壽命。
比(bi)(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積，指(zhi)的是(shi)每(mei)克填料的表(biao)(biao)面(mian)(mian)積，如(ru)180m2/g—350m2/g，與粒(li)度和含孔率(lv)有關；比(bi)(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積大，會(hui)增加(jia)樣品與鍵(jian)合相之(zhi)間的反應，增加(jia)保留和分離(li)度；比(bi)(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積小(xiao)則(ze)可以(yi)縮短分析(xi)時間和平衡時間，并不是(shi)比(bi)(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積大或者(zhe)小(xiao)就更好，需要選擇合適的比(bi)(bi)表(biao)(biao)面(mian)(mian)積。
硅(gui)膠基質：通用的基質，強(qiang)度大，化學修飾容易(yi)，但(dan)使用的pH值范(fan)圍(wei)有限(一般為(wei)2—8，特殊修飾的可以達到1—12)。
聚(ju)(ju)合物基(ji)質：多(duo)為聚(ju)(ju)苯(ben)乙烯(xi)—二乙烯(xi)基(ji)苯(ben)或聚(ju)(ju)甲基(ji)丙烯(xi)酸脂，化(hua)學(xue)穩定，應用pH范圍寬，具有更強的疏水性，對蛋白質等樣品分離效果較(jiao)好；但強度較(jiao)小(xiao)，有機(ji)溶劑可能導(dao)致聚(ju)(ju)合物溶脹而受(shou)損，批(pi)次重復性較(jiao)差(cha)，商品化(hua)色譜(pu)柱不多(duo)，一(yi)般價格(ge)較(jiao)貴。
載(zai)碳量(liang)：基質表面鍵合相的比例，載(zai)碳量(liang)高，則(ze)保留增加(jia)，適合分析(xi)非極性化合物。
鍵(jian)合相(xiang)：鍵(jian)合試劑不(bu)同(tong)，對化合物(wu)的(de)選擇性不(bu)同(tong)，一般長鏈的(de)烷基鍵(jian)合相(xiang)(C18 、C8)比短鏈的(de)(C4、 C3)穩定(ding)；非極性的(de)鍵(jian)合相(xiang)比極性的(de)鍵(jian)合相(xiang)(-NH2)穩定(ding)。
封端(duan)：用(yong)短鏈將(jiang)裸露的(de)硅羥基鍵合后封閉起(qi)來，以減少殘留的(de)硅醇基，減輕待測組分(fen)(fen)與(yu)酸性硅羥基反應(ying)而(er)引起(qi)的(de)色(se)譜峰拖(tuo)尾現象(xiang)。尤其對于極性樣品而(er)言，未封端(duan)處理的(de)色(se)譜柱分(fen)(fen)離效果較差(cha)。
原則三：看(kan)正(zheng)相(xiang)、反(fan)相(xiang)色譜
| 固定相極性(xing) | 流動相極(ji)性 | 出峰順序 |
| 反相(xiang)吸附色譜 | 非極性 | 強極性(xing)（水、甲醇、乙腈等） | 強極(ji)性物質先(xian)出峰 |
| 正相吸附色譜 | 極性 | 弱極性(xing)（己烷、庚烷等） | 弱極性物質先出(chu)峰 |
原則四：根據柱長及內徑選擇
長度的選擇：柱越長，總柱效越高(n值越大)，柱越長，分析時間也越長。250—300mm是普遍的柱長，實驗室一半以上的工作都是采用此規格柱子，一般用來分離l0到50個組份的中等至復雜混合物;500—600mm，要求較高分辨率的應用，—般用來分離大于50個組份或包含有難分離物質的復雜樣品程序升溫分析。
內徑：柱效率與柱半徑平方成反比，內徑越小柱效越高，但內徑越大，柱容量也增加，允許進樣量就越多。當進樣量超過柱容量時，則因柱內每塊理論板內不能建立真正的平衡，將會導致色譜蜂畸變，柱分辨率降低，重現性不好。因此對于復雜樣品需要精確分離，必須使用小內徑柱子。另一方面若樣品中存在具有很不相同濃度組份化合物，為了增加樣品容量就必須使用內徑大的柱子，目前實驗室使用最常見的柱子內徑一般是4.6mm。
一般選擇原則(ze)：分析(xi)大(da)分子量(liang)化(hua)合(he)(he)物選擇大(da)孔徑色(se)(se)譜柱；對于高pH值或者堿性(xing)化(hua)合(he)(he)物需要選擇高封端(duan)或者特殊封端(duan)的色(se)(se)譜柱，以改善(shan)峰形，延長(chang)色(se)(se)譜柱使用(yong)壽命等。
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