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在色譜操作過程中需要注意下列問題

更新時間(jian):2020-06-16

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   色譜柱的正確使用和維護十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題:

  ① 避免壓(ya)(ya)力和溫度的(de)急劇變化及任何(he)機械(xie)震動。溫度的(de)突(tu)然(ran)變化或(huo)者使其從高處掉下都會影響柱內的(de)填充狀況;柱壓(ya)(ya)的(de)突(tu)然(ran)升高或(huo)降低也會沖動柱內填料,因此(ci)在(zai)調(diao)節(jie)流速時應該緩慢進行(xing),在(zai)閥(fa)進樣時閥(fa)的(de)轉動不能過緩(如前所述(shu))。

  ② 應逐漸改變溶劑的組成,特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。
 

色譜柱

  ③ 一般說(shuo)來色譜柱(zhu)不能反沖(chong),只有生產(chan)者指明該柱(zhu)可以反沖(chong)時,才可以反沖(chong)除去留(liu)在(zai)柱(zhu)頭的雜質。否(fou)則反沖(chong)會迅速降低(di)柱(zhu)效。

  ④ 選擇使用(yong)適宜的(de)流動相(xiang)(尤其(qi)是pH),以(yi)避免(mian)(mian)固定相(xiang)被(bei)(bei)破壞。有時可以(yi)在(zai)進樣器前(qian)面連接一(yi)預(yu)柱,分(fen)析(xi)柱是鍵(jian)合硅(gui)膠(jiao)時,預(yu)柱為硅(gui)膠(jiao),可使流動相(xiang)在(zai)進入分(fen)析(xi)柱之前(qian)預(yu)先被(bei)(bei)硅(gui)膠(jiao)“飽和”,避免(mian)(mian)分(fen)析(xi)柱中的(de)硅(gui)膠(jiao)基質(zhi)被(bei)(bei)溶解。

  ⑤ 避免(mian)將基質(zhi)復(fu)雜的樣品(pin)尤其是(shi)生物樣品(pin)直(zhi)接注入(ru)柱(zhu)內,需要對樣品(pin)進行預處理或者在(zai)進樣器和色譜柱(zhu)之間(jian)連(lian)接一保(bao)(bao)護柱(zhu)。保(bao)(bao)護柱(zhu)一般是(shi)填有相似(si)固(gu)定(ding)相的短柱(zhu)。保(bao)(bao)護柱(zhu)可以(yi)而且應該經常更換。

  ⑥ 經常(chang)用強溶劑(ji)沖洗,清(qing)(qing)除保留在柱內的(de)雜(za)質。在進行清(qing)(qing)洗時,對流路系統中流動相的(de)置(zhi)換應(ying)以相混(hun)溶的(de)溶劑(ji)逐漸過渡,每種流動相的(de)體積(ji)應(ying)是柱體積(ji)的(de)20倍左(zuo)右,即常(chang)規分析需(xu)要50~75ml。

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